尊龙凯时推出的产品是一款基于探针法荧光定量PCR原理开发的检测试剂盒，具有以下显著特点：

产品特点

• 1. 即开即用，用户只需提供样品DNA模板。
• 2. 优化后的引物成分具有高灵敏度。
• 3. 提供阳性对照，便于识别假阴性样品。
• 4. 高特异性，引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区，避免与其他生物样本的DNA交叉反应。
• 5. 可用于定性及定量检测，定量检测时线性范围至少可达5个数量级。
• 6. 支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
• 7. 本产品仅供科研使用。

操作方法

1. DNA提取（样本制备区）

使用自选方法提取并纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大部分核酸提取试剂盒兼容。

2. 稀释标准曲线样品（样本制备区）

为了避免交叉污染，稀释操作应在独立区域进行。具体步骤如下：

1. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL的阳性对照（1×10E8拷贝/μL），摇匀1分钟，得到1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，置于冰上待用。
4. 将阳性对照稀释到6号管中，得到1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品，置于冰上待用。
5. 依次重复上述稀释步骤，直到获得6个稀释样品。如果不制作标准曲线，可直接将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL。

3. 试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样品数量准备N+2个qPCR管（包含阴性对照和阳性对照），向各PCR管中加入相应成分（具体见说明书）。

4. 添加模板（模板添加区）

向qPCR管中加入2μL模板，顺序为阴性对照、待测样品模板和婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

5. 扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放入PCR扩增仪器中，按照程序进行扩增（具体见说明书）。

6. 结果分析

若制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，由此推算待测样品DNA浓度的log值。如果未制作标准曲线，则根据以下标准判断结果：

• 阳性对照：Ct值<30，呈现明显的指数增长和典型的S型曲线。
• 阴性对照：Ct值38或无Ct值，无明显增加。
• 样本检测结果：Ct值<35，表明样本中检测到婴儿利什曼虫，结果为阳性；Ct值38或无Ct值，表明未检测到该病原体，结果为阴性；Ct值在35-38范围内需要复检。

运输与保存

尊龙凯时的试剂盒须低温运输，保存于-20℃，有效期为一年。阳性对照应单独放置，避免污染其他试剂。